Duodécima noche explora varios temas, incluidos el amor, el disfraz y el engaño. Los personajes de la obra emplean varios disfraces y engaños para lograr sus objetivos. Por ejemplo, Viola se disfraza de un hombre llamado Cesario para servir al Duque Orsino. La obra también contiene identidades equivocadas, como cuando Malvolio confunde la carta de Olivia con una nota de amor para él. Twelfth Night también presenta una exploración compleja del amor y sus múltiples formas, desde el amor no correspondido hasta el amor romántico y el amor propio.